The tärkein ero nitroselluloosan ja nailonkalvon välillä on, että nitroselluloosamembraanilla on suuri affiniteetti proteiinin sitoutumiseen, kun taas nylonkalvolla on suuri affiniteetti nukleiinihappositoutumiseen. Lisäksi hydrofobiset ja sähköstaattiset vuorovaikutukset sitovat makromolekyylejä nitroselluloosakalvoihin, kun taas ioniset, hydrofobiset ja sähköstaattiset vuorovaikutukset sitovat makromolekyylejä nylonkalvoihin

Nitroselluloosa ja nailonkalvo ovat kahdenlaisia ​​kalvoja, joihin makromolekyylit siirretään geelistä. Nitroselluloosakalvoja voidaan kuitenkin käyttää myös DNA: n ja RNA: n sitomiseen.

Affiniteetti, Biodyne A, Biodyne B, Nitroselluloosa, Nukleiinihapot, Nylon, Huokoskoko, Proteiinit

Mikä on nitroselluloosakalvo

Nitroselluloosamembraani on yleinen matriisi, jota käytetään Western-blottauksessa suuren proteiinia sitovan affiniteetin vuoksi. Sitä voidaan kuitenkin käyttää nukleiinihappojen havaitsemiseen immobilisoitujen proteiinien ja glykoproteiinien lisäksi. Makromolekyylien immobilisaatio tapahtuu pääasiassa hydrofobisten vuorovaikutusten kautta. Vetysidoksia muodostuu myös kalvon nitroryhmien ja proteiinien aminohapposivuketjujen väliin. Proteiinien immobilisaatio on korkea korkeissa suola- ja alhaisissa metanolipitoisuuksissa.

Kuva 1: Blotin periaate

Nitroselluloosamembraaneja on saatavana 100% puhtaina nitroselluloosamuotoina, joiden pinta -ala on tasainen. Käytettävissä olevat esikoot ovat 0,2 μm ja 0,45 μm. Pieni huokoskoko on parempi sitoutumiseen pienillä proteiineilla (<14 kDa). Proteiinien sitoutumis- ja pidätyskyky on 80-250 μg/cm². Esivalmistetut kalvot ovat käyttövalmiita. Yksi nitroselluloosakalvojen tärkeimmistä eduista on sen erittäin alhainen tausta, koska se voidaan helposti tukkia. Tuetut nitroselluloosakalvot voidaan irrottaa ja uudistaa.

Mikä on nylonkalvo

Nylonkalvo on laajalti käytetty matriisi nukleiinihappojen sitomiseen. Nailonkalvot ovat mekaanisesti vahvoja kuin nitroselluloosakalvot. Blottauksessa käytetään kahta päätyyppiä nailonkalvoja: Biodyne A ja Biodyne B. Molempien tyyppien huokoskoko on 0,45 μm. Ne kestävät kuumuutta ja liuottimia. Lisäksi ne eivät kutistu, halkeile tai repeä. Molemmat antavat alhaisen taustan kuin nitroselluloosakalvot.

Kuva 2: Southern Blot -kalvo

Nitroselluloosan ja nylonkalvon väliset yhtäläisyydet

Ero nitroselluloosan ja nylonkalvon välillä

Määritelmä

Nitroselluloosamembraani viittaa tahmeaan kalvoon, jota käytetään nukleiinihappojen ja proteiinien immobilisointiin blottauksessa, kun taas nylonkalvo viittaa kalvotyyppiin, jolla on suuri lujuus ja lämmönkestävyys ja jota käytetään makromolekyylien immobilisointiin.

Koostuu

Nitroselluloosakalvot koostuvat nitratusta selluloosasta, kun taas nylonkalvot koostuvat modifioimattomasta tai positiivisesti varautuneesta Biodyne A- ja Biodyne B -nylonista.

Huokoskoko

Nitroselluloosamembraanien huokoskoot ovat 0,2 μm ja 0,45 μm, kun taas nailonkalvojen huokoskoko on 0,45 μm.

Vahvuus

Nitroselluloosakalvot ovat hauraita, joten niitä ei voida käyttää uudelleen, kun taas nailonkalvot ovat mekaanisesti vahvoja.

Siirtomenetelmä

Elektroforeettista siirtoa käytetään pääasiassa proteiinien siirtämiseen nitroselluloosakalvoille, kun taas kapillaarisiirto on yleinen käytäntö nylonkalvojen kanssa.

Affiniteetti

Nitroselluloosakalvoilla on suuri affiniteetti proteiiniin, kun taas nailonkalvoilla on suuri affiniteetti nukleiinihappoihin. Nitroselluloosakalvoja voidaan käyttää myös nukleiinihappoihin.

Puhdistus

Nitroselluloosamembraanit ovat parempia Western blotting -tekniikalle, kun taas nailonkalvot ovat parempia Southern- ja Northern Blotting -menetelmille.

Sitovat vuorovaikutukset

Hydrofobiset ja sähköstaattiset vuorovaikutukset sitovat makromolekyylejä nitroselluloosakalvoihin, kun taas ioniset, hydrofobiset ja sähköstaattiset vuorovaikutukset sitovat makromolekyylejä nailonkalvoihin.

Proteiinin sitomiskyky

Nitroselluloosamembraanin proteiinisidoskyky on 80-250 μg/cm² kun taas nylonkalvon proteiinisidoskapasiteetti on 150-200 μg/cm².

Johtopäätös

Nitroselluloosamembraani on hauras kalvo, jota käytetään pääasiassa proteiinin immobilisoimiseen Western blotting -tekniikalla, kun taas nylonkalvo on vahva kalvo, jota käytetään pääasiassa nukleiinihappojen immobilisoimiseen. Nitroselluloosakalvot sitovat molekyylejä hydrofobisten vuorovaikutusten kautta, kun taas nailonkalvot sitovat molekyylejä sähköstaattisten vuorovaikutusten kautta. Siksi tärkein ero nitroselluloosan ja nailonkalvon välillä on affiniteetti.

Viite:

1. ”Nitroselluloosamembraanit Western -blottausta varten | Thermo Fisher Scientific - LK. ” Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, saatavana täältä 2. "Biodyne A Nylon -kalvo, 0,45 m, 8 cm x 12 cm." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, saatavana täältä 3. "Biodyne B nylonkalvo, 0,45 m, 8 cm x 12 cm." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, saatavana täältä

Kuva:

1. ”Blot-biologia”, Gbdivers-Oma työ (CC BY-SA 3.0) Commons Wikimedia2: n kautta. "Southern blot -kalvo" Bojan Žunar-Oma työ (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedian kautta