The tärkein ero GFP: n ja EGFP: n välillä on, että GFP (Green Fluorescent Protein) on proteiini, joka näyttää kirkkaan vihreää fluoresenssia altistettuna siniselle valolle, kun taas EGFP (tarkoittaa Enhanced Green Fluorescence Protein) osoittaa voimakkaampaa fluoresenssia kuin GFP. Lisäksi yksi tärkeä ero GFP: n ja EGFP: n välillä on se, että GFP on villityypin proteiini, joka on eristetty meduusoista Aequorea victoria. EGFP on kuitenkin suunniteltu versio alkuperäisestä villityypistä.

GFP ja EGFP ovat kahdenlaisia ​​proteiineja, jotka toimivat sisäisinä kromoforeina. Ne eivät vaadi lisäentsyymejä/substraatteja, kofaktoria tai geenituotteita sen värin osoittamiseksi. Siksi molempia käytetään geeniekspression raportoijana molekyylibiologiassa.

Kromofori, EGFP, GFP, vihreä fluoresenssi, villityypin proteiini

Mikä on GFP

GFP (vihreä fluoresoiva proteiini) on proteiini, joka hehkuu vihreänä sinisen tai UV -valon alla. Sitä esiintyy luonnollisesti meduusoissa, Aequorea Victoria. GFP koostuu 238 aminohaposta. GFP: n koko on 26,9 kDa. GFP on tehokas työkalu molekyylibiologiassa, koska se on luontainen fluoresenssi ilman lisämolekyylejä. Fluoresenssi johtuu proteiinin vierekkäisten aminohappojen kovalenttisesta uudelleenjärjestelystä. Proteiinin taittamisen jälkeen pääketjun atomit Ser65, Tyr66 ja Gly67 muodostavat erittäin konjugoidun, tasomaisen p -hydroksibentsylideeni -imidatsolinonikromoforin O: n läsnä ollessa.₂. Kiderakenteiden tutkimukset paljastavat, että kromoforin pakkaaminen molekyylin β-tynnyrirakenteen ytimeen suojaa sitä sammumiselta paramagneettisen hapen, vesidipolien tai cis-trans-isomeroinnin kautta. Lisäksi kromoforin ei-kovalenttinen vuorovaikutus naapurimolekyylien kanssa parantaa sen spektriominaisuuksia.

Kuva 1: GFP: n ja fluoroforin nauhaesitys

GFP voidaan tuoda organismiin siirtogeenisten muutosten aikana. Sitä voidaan ylläpitää myös sukupolvien ajan. Villityypin GFP: n suurin haittapuoli on proteiinin heikentynyt tehokkuus solukuvantamisessa, mikä johtuu alhaisesta hyötysuhteen taittumisesta fysiologisissa lämpötiloissa, kuten 37 ° C, jolloin fluoresoiva signaali katoaa. Myös GFP: n kypsymisnopeus isäntäsolun sisällä on hidas samalla kun se pyrkii aggregoitumaan. Kaksi virityspiikkiä voidaan havaita kahden erilaisen kromoforin muodon vuoksi. Proteiinitekniikka on kuitenkin ratkaissut suurimman osan ongelmista ottamalla käyttöön villityypin GFP: n muunnelmia.

Mikä on EGFP

EGFP (tehostettu vihreä fluoresenssiproteiini) on muunnelma villityypin GFP: stä, jolla on korkeampi intensiteetti GFP: n suhteen. Se on yksi ensimmäisistä ja tärkeimmistä GFP -muunnelmista. Kaksi mutaatiota, F64L ja S65T, tuottavat EGFP: n, jolla on suurempi taittotehokkuus 37 ° C: ssa. Mielenkiintoista on, että EGFP: llä on yksi virityshuippu ~ 490 nm: ssä, koska S65T vaimentaa 395 nm: n piikin, koska se moduloi Glu222: n ionisoitua tilaa lähellä. Toisaalta F64L lisää taittotehokkuutta 37 ° C: ssa. Tärkeää on, että EGFP: n kodonisekvenssi on optimoitu ilmentymiseen nisäkässoluissa.

Kuva 2: EGFP -lauseke

GFP: n ja EGFP: n samankaltaisuudet

Ero GFP: n ja EGFP: n välillä

Määritelmä

GFP: Villityyppinen proteiini, joka osoittaa vihreää fluoresenssia sinisessä tai UV-valossa ja esiintyy luonnollisesti meduusoissa, Aequorea Victoria

EGFP: Muunnelma villityypin GFP: stä, jolla on korkeampi intensiteetti GFP: n suhteen

Tarkoittaa

GFP: Vihreä fluoresenssiproteiini

EGFP: Parannettu vihreä fluoresenssiproteiini

Alkuperä

GFP: Villi tyyppi

EGFP: Mutantti

64^th Aminohappo

GFP: Fenyylialaniini

EGFP: Leusiini

65^th Aminohappo

GFP: Serine

EGFP: Treoniini

Värin kirkkaus

GFP: Kirkkaanvihreä

EGFP: Kirkkaampi vihreä

Jännityshuiput

GFP: Kaksi huippua (395 nm ja 490 nm)

EGFP: Yksi huippu (490 nm)

Taittotehokkuus 37 ° C: ssa

GFP: Matala

EGFP: Korkea

Johtopäätös

GFP on villityyppinen proteiini, joka näyttää kirkkaan vihreältä fluoresenssilta altistettuna siniselle tai UV-valolle. EGFP on GFP: n muunnelma, jolla on korkeampi intensiteetti fluoresenssi verrattuna GFP: hen. Siten tärkein ero GFP: n ja EGFP: n välillä on kunkin proteiinin lähettämän vihreän fluoresenssin intensiteetti.

Viite:

1. Arpino, James A. J., et ai. "Parannetun vihreän fluoresoivan proteiinin kristallirakenne 1,35 Å: n resoluutioon paljastaa vaihtoehtoiset muodot Glu222: lle." PLOS Medicine, Public Library of Science, journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0047132.

Kuva:

1. ”Gfp ja fluorofori”, kirjoittanut Raymond Keller (Raymond Keller (keskustelu)), Crystal Proteinin suojeluksessa. - Oma työ (julkinen) Commons Wikimedia 2. kautta. ”Fgams ppat egfp puncta” Kirjoittanut Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, et ai. (2013) Ohimenevästi transfektoidut puriinibiosynteettiset entsyymit muodostavat stressikappaleita. PLoS ONE 8 (2): e56203. doi: 10.1371/journal.pone.0056203 (CC BY 3.0) Commons Wikimedian kautta