The tärkein ero GFP: n ja YFP: n välillä on se GFP: n väri on vihreä, kun se altistuu valolle, vaihtelee sinisestä ultraviolettivaloon, kun taas YFP: n väri on keltainen, kun se altistetaan samalle valolle. Lisäksi GFP on alun perin johdettu meduusoista Aequorea Victoria, kun taas YFP on GFP -proteiinin geneettinen mutantti.

GFP (vihreä fluoresoiva proteiini) ja YFP (keltainen fluoresoiva proteiini) ovat kahden tyyppisiä fluoresoivia proteiineja, joilla on erilaiset fluoresoivat värit altistettaessa valolle vaihtelevat sinisestä ultraviolettialueeseen. Niiden sovellukset molekyylibiologiassa ovat kuitenkin samat.

Fluoresoivat proteiinit, GFP (vihreä fluoresoiva proteiini), GFP -johdannaiset, YFP (keltainen fluoresoiva proteiini)

Mikä on GFP

GFP (vihreä fluoresoiva proteiini) on bioluminesoiva polypeptidiproteiini, jota esiintyy luonnossa meduusoissa, Aequorea Victoria ja monissa muissa meren eliöissä. Aequorea Victoriassa se tunnetaan nimellä aequorin ja säteilee fluoresenssia, kun se altistuu alueille sinisestä ultraviolettivaloon. Se tarkoittaa; GFP absorboi kokonaan sinisen valon (475 nm) tai 395 nm: n valon pitkällä UV -alueella ja säteilee vihreää valoa (509 nm).

Kuva 1: Aequorea Victoria

GFP -proteiini sisältää 238 aminohappoa ja proteiinin koko on 26,9 kDa. Se taittuu muodostaen beetatynnyrin muodon. Tässä osa proteiinista, joka tekee siitä fluoresoivan, muodostuu pääketjun atomien Ser65, Tyr66 ja Gly67 konjugaatiosta muodostaen erittäin konjugoidun, tasomaisen p-hydroksibentsylideeni-imidatsolinonikromoforin hapen läsnä ollessa. Kromofori on pakattu beeta-tynnyrirakenteen sisään, mikä suojaa kromoforia sammumiselta paramagneettisen hapen, vesidipolien tai cis-trans-isomeroinnin kautta. Myös kromoforin ei-kovalenttinen vuorovaikutus naapurimolekyylien kanssa parantaa sen spektriominaisuuksia.

Kuva 2: GFP -rakenne

Lisäksi GFP: tä käytetään molekyylibiologiassa geeniekspression raportoijana, joka osoittaa vieraan geenin ilmentymisen isäntäorganismin sisällä. Sitä voidaan myös käyttää määrittämään solun alisijainnit, joissa tiettyä proteiinia aiotaan ilmentää. Täällä kiinnostuksen kohteena oleva proteiini fuusioidaan GFP: n kanssa ja tämä fuusioproteiini muutetaan isäntäksi.

Kuva 3: EGFP -lauseke

Villityypin GFP: n suurin haittapuoli on kuitenkin sen heikentynyt tehokkuus johtuen alhaisesta hyötysuhteen taittumisesta fysiologisissa lämpötiloissa, kuten 37 ° C, jolloin fluoresoiva signaali katoaa. Myös GFP: n alhainen kypsymisnopeus sallii proteiinin aggregoitumisen solun sisällä. Parannettu GFP (EGFP) on villityypin GFP: n johdannainen, jonka 37-asteen taittotehokkuuden (F64L) pistemutantti on yhden pistemutaation (S65T) tuottama teline ja jolla on parannetut spektriominaisuudet, mukaan lukien lisääntynyt fluoresenssi, valostabiilisuus ja päävirityspiikin siirtyminen 488 nm: iin, jolloin huippuemissio pidetään 509 nm: ssä.

Mikä on YFP

YFP (keltainen fluoresoiva proteiini) on GFP -johdannainen, joka on otettu käyttöön geneettisenä mutaationa. Itse asiassa se on T203Y -mutaation aikaansaama värimutantti. Tämä johtaa π-elektronien pinoamisvuorovaikutuksiin substituoidun tyrosiinitähteen ja kromoforin välillä. Siksi YFP absorboi vihreää valoa aallonpituudella 514 nm ja säteilee keltaista väriä 527 nm: ssä.

Kuva 4: GFP -johdannaiset

Yhtäläisyyksiä GFP: n ja YFP: n välillä

Ero GFP: n ja YFP: n välillä

Määritelmä

GFP viittaa proteiiniin, joka hehkuu vihreänä loisteputken valossa ja löytyy luonnollisesti meduusoista, Aequorea Victoria, kun taas YFP viittaa vihreän fluoresoivan proteiinin (GFP) geneettiseen mutanttiin. Tämä on siis perustavanlaatuinen ero GFP: n ja YFP: n välillä.

Tarkoittaa

GFP tarkoittaa vihreää fluoresoivaa proteiinia ja YFP keltaista fluoresoivaa proteiinia.

Säteilee väriä UV -säteilyssä

Kuten heidän nimensä viittaavat, tärkein ero GFP: n ja YFP: n välillä on se, että GFP lähettää vihreää valoa, kun taas YFP lähettää keltaista väriä.

Esiintyminen

Lisäksi GFP esiintyy luonnollisesti monissa meren eliöissä, mukaan lukien meduusat, Aequorea Victoria, kun taas YFP on GFP: n geneettinen mutantti. Siksi tämä on toinen ero GFP: n ja YFP: n välillä.

Jännityshuippu

Lisäksi GFP: n tärkein virityshuippu on 395 nm: ssä ja vähäinen virityshuippu 475 nm: ssä, kun taas YFP: n virityshuippu on 514 nm: ssä.

Päästöhuippu

Myös GFP: n emissiopiikki on 509 nm: ssä, kun taas YFP: n emissiopiikki on aallonpituudella 527 nm. Siksi tämä on myös ero GFP: n ja YFP: n välillä.

Sovellukset

Johtopäätös

GFP on fluoresoiva proteiini, jota esiintyy luonnollisesti meduusoissa Aequorea Victoria. Sitä käytettiin molekyylibiologiassa ilmentymisraportoijana ja fuusioituneen proteiinin lokalisoinnin visualisoimiseksi. Yleensä GFP säteilee kirkkaan vihreää fluoresenssia altistettaessa siniselle ultraviolettivalolle. Vertailun vuoksi YFP on GFP: n geneettinen mutantti, joka säteilee keltaista fluoresenssia altistettaessa siniselle ultraviolettivalolle. Siksi tärkein ero GFP: n ja YFP: n välillä on niiden lähettämän fluoresenssin väri ja niiden alkuperä.

Viitteet:

1. "Vihreä fluoresoiva proteiini (GFP)." Thermo Fisher Scientific, Thermo Fisher Scientific, saatavana täältä. Khetrapal, Afsaneh. "GFP -johdannaiset: CFP ja YFP." News-Medical.net, News Medical, 25. tammikuuta 2019, saatavana täältä.

Kuva:

1. ”Aequorea victoria”, kirjoittanut Mnolf-Kuva otettu Monterey Bayn akvaariossa, Kalifornia, USA (CC BY-SA 3.0) Commons Wikimedian kautta 2. ”ATE 1ema EBI” Jawahar Swaminathan ja Euroopan bioinformatiikan instituutin MSD-henkilöstö (julkinen Verkkotunnus) Commons Wikimedia 3. kautta. ”Fgams ppat egfp puncta” Kirjoittanut Zhao A, Tsechansky M, Swaminathan J, Cook L, Ellington AD, et ai. (2013) Ohimenevästi transfektoidut puriinibiosynteettiset entsyymit muodostavat stressikappaleita. PLoS ONE 8 (2): e56203. doi: 10.1371/journal.pone.0056203-http://www.plosone.org/article/info:doi/10.1371/journal.pone.0056203 (CC BY 3.0) Commons Wikimedia 4: n kautta. ”174-GFPLikeProteins GFP-like Proteiinit ”David Goodsell - RCSB Protein Data Bank Molecule of the Month (CC BY 3.0) Commons Wikimedian kautta