The tärkein ero normaalin faasin ja käänteisfaasikromatografian välillä on se normaalifaasikromatografiassa on hyvin polaarinen kiinteä vaihe ja ei-polaarinen liikkuva faasi, kun taas käänteisfaasikromatografiassa on ei-polaarinen kiinteä vaihe ja polaarinen liikkuva faasi. Lisäksi normaalifaasikromatografian kiinteä vaihe on pääasiassa puhdasta piidioksidia ja liikkuva faasi on vedetön liuotin, kuten kloroformi, kun taas käänteisfaasikromatografian kiinteä faasi on muunnettu piidioksidisubstraatti, jossa on pitkät hydrofobiset pitkät ketjut ja faasi on pääasiassa vettä, metanolia tai asetonitriiliä.

Normaali- ja käänteisfaasikromatografia ovat kahdenlaisia ​​HPLC-menetelmiä (korkean suorituskyvyn nestekromatografia), jotka toimivat korkeassa paineessa. Yleensä niillä on suurempi resoluutio verrattuna tavalliseen nestekromatografiaan.

HPLC, nestekromatografia, liikkuva faasi, normaali faasikromatografia, käänteisfaasikromatografia, kiinteä vaihe

Mikä on normaali vaihekromatografia

Normaalifaasikromatografia on eräänlainen HPLC -tekniikka. Se erottaa analyytit vuorovaikutusasteen perusteella absorboivan aineen, joka on polaarinen piidioksidi, suhteen. Siksi tämän tyyppisen kromatografian kiinteä vaihe on hydrofiilinen. Se voi myös tehdä hydrofiilisiä vuorovaikutuksia näyteseoksen hydrofiilisten molekyylien kanssa. Yleensä näihin vuorovaikutuksiin kuuluu vetysidos, dipoli-dipoli-vuorovaikutus jne. Siksi enemmän ei-polaarisia analyyttejä pysyy pidempään paikallaan olevassa vaiheessa, mikä pidentää retentioaikaa.

Kuva 1: Normaalivaihe- ja käänteisfaasikromatografia - ominaisuudet

Lisäksi liikkuva faasi normaalifaasikromatografiassa on ei-polaarinen ja ei-vesipitoinen. Siksi ei-polaariset tai hydrofobiset analyytit seoksessa peseytyvät tehokkaasti liikkuvan faasin kanssa prosessin alussa. Samaan aikaan analyyttien retentioaika lyhenee liikkuvan faasin napaisuuden kasvaessa. Lisäksi retentioajan huono toistettavuus on normaalin faasikromatografian suurin haitta. Pohjimmiltaan tämä johtuu siitä, että piidioksidin pinnalla on vesikerros tai proottisia orgaanisia liuottimia. Tämä kuitenkin poistetaan käänteisfaasikromatografiassa.

Mikä on käänteisfaasikromatografia

Käänteisfaasikromatografia on eräänlainen viimeaikainen HPLC. Sillä on lisääntynyt retentioajan toistettavuus verrattuna normaalifaasikromatografiaan. Pohjimmiltaan tämä toistettavuuden kasvu saavutetaan tekemällä kiinteä faasi ei-polaariseksi. Tätä varten kiinteän piidioksidifaasin pinta muutetaan RMe2SiCl: ksi, jossa R on suoraketjuinen alkyyliryhmä, kuten C18H37 tai C8H17. Kiinteän faasin ei-polaarisen luonteen vuoksi näytteen seoksessa olevilla vähemmän polaarisilla analyytteillä on kuitenkin yleensä pidempi retentioaika verrattuna normaalifaasikromatografiaan.

Kuva 2: Käänteisfaasikromatografia - eluointi

Normaali- ja käänteisfaasikromatografian samankaltaisuudet

Normaali- ja käänteisfaasikromatografian ero

Määritelmä

Normaalifaasikromatografia viittaa erotusmenetelmään, joka mahdollistaa seoksen komponenttien jakamisen kahden faasin välillä, joista toinen on polaarinen kiinteä faasi, kun taas liikkuva faasi on ei-polaarinen. Sitä vastoin käänteisfaasikromatografia viittaa erotusmenetelmään, jonka liikkuva faasi on polaarisempi kuin paikallaan oleva faasi.

Evoluutio

Normaalifaasikromatografia kehitettiin 1970 -luvulla nestekromatografian muodossa. Käänteisfaasikromatografia on kuitenkin hiljattain kehitetty HPLC -muoto.

Kiinteä vaihe

Lisäksi normaalifaasikromatografiassa käytetään polaarista kiinteää faasia, joka on pääasiassa puhdasta piidioksidia, kun taas käänteisfaasikromatografiassa käytetään ei-polaarista kiinteää faasia, joka on muunnettu piidioksidisubstraatti, jossa on pitkät hydrofobiset pitkät ketjut.

Mobiilivaihe

Normaalifaasikromatografia käyttää ei-polaarista, vedetöntä liuotinta liikkuvana faasina, joka on pääasiassa kloroformia, kun taas käänteisfaasikromatografia käyttää polaarista liikkuvaa faasia, joka on pääasiassa vettä, metanolia tai asetonitriiliä.

Erotustyypit

Analyytit mobiilivaiheessa

Normaalifaasikromatografiassa liikkuva faasi kuljettaa ei-polaarisia analyyttejä erottamisen alussa, kun taas käänteisfaasikromatografiassa liikkuva faasi kuljettaa polaarisia analyyttejä.

Säilytysajan pidentäminen

Ei-polaarinen liikkuva faasi lisää normaalin faasin kromatografian retentioaikaa, kun taas polaarinen liikkuva faasi lisää käänteisfaasikromatografian retentioaikaa.

Eluointi

Analyytit voidaan eluoida lisäämällä liikkuvan faasin napaisuutta normaalifaasikromatografiassa, kun taas analyytit voidaan eluoida vähentämällä liikkuvan faasin napaisuutta käänteisfaasikromatografiassa.

Kiinteän vaiheen ominaisuudet

Normaalifaasikromatografian kiinteä faasi sisältää kerroksen vettä tai proottista orgaanista liuotinta, kun taas käänteisfaasikromatografian kiinteä faasi ei sisällä vettä tai proottisen liuottimen kerrosta.

Retentioajan toistettavuus

Kolonnin vauriot

Normaalifaasikromatografiapylväs on helppo vaurioittaa, kun taas käänteisfaasikromatografian kolonnia on vaikea vahingoittaa.

Johtopäätös

Normaalifaasikromatografia on eräänlainen HPLC, jossa käytetään polaarista kiinteää faasia ja ei-polaarista liikkuvaa faasia. Tämän seurauksena seoksen ei-polaariset analyytit siirtyvät helposti pois kolonnista samalla, kun ne mahdollistavat polaaristen analyyttien erottamisen perustuen vuorovaikutusasteeseen kohti kiinteän faasin absorboivaa ainetta. Toisaalta käänteisfaasikromatografia on eräänlainen viimeaikainen HPLC, jossa käytetään ei-polaarista kiinteää faasia ja polaarista liikkuvaa faasia. Siksi polaariset analyytit siirtyvät pois kolonnista liikkuvan faasin mukana, mikä mahdollistaa ei-polaaristen analyyttien erottamisen kiinteän faasin kanssa tapahtuvan vuorovaikutuksen asteen perusteella. Näin ollen tärkein ero normaalin ja käänteisfaasikromatografian välillä on kiinteiden ja liikkuvien faasien tyyppi.

Viitteet:

1. "HPLC -erotusmoodit." Vesi, saatavilla täältä.

Kuva:

1. ”HILIC-käyttötavat ja -hyödyt”, Chem461S16Group4-Oma työ (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedian kautta 2. “Käänteisen vaiheen gradientin eluointikaavio” Nategmin mukaan-Oma työ (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedian kautta