Tärkein ero - Kloonausvektori vs Expression Vector

Kloonausvektori ja ekspressiovektori ovat kahdenlaisia ​​vektoreita, joita käytetään yhdistelmä -DNA -tekniikassa vieraiden DNA -segmenttien kuljettamiseen kohdesoluun. Sekä kloonaus- että ekspressiovektorit käsittävät replikaation alkuperän, ainutlaatuiset restriktiokohdat ja valittavissa olevan markkerigeenin vektorisekvensseissään. Sekä kloonaus- että ekspressiovektorit replikoituvat itsestään replikaation alkuperän vuoksi. Kloonausvektorit voivat olla joko plasmideja, kosmideja tai bakteriofageja. The tärkein ero kloonausvektorin ja ekspressiovektorin välillä on se kloonausvektoria käytetään vieraiden DNA -segmenttien kuljettamiseen isäntäsoluun, kun taas ekspressiovektori on kloonausvektorin tyyppi, joka sisältää sopivia ekspressiosignaaleja, joilla on maksimaalinen geeniekspressio.

Keskeiset alueet

1. Mikä on kloonausvektori - Määritelmä, tyypit, käyttötavat 2. Mikä on lausekevektori - Määritelmä, tyypit, käyttötavat 3. Mitkä ovat kloonausvektorin ja lausekevektorin väliset yhtäläisyydet? - Yleiskuvaus 4. Mitä eroja kloonausvektorin ja lausekevektorin välillä on? - Keskeisten erojen vertailu

Keskeiset termit: Bakteriofagit, kloonausvektori, kosmidit, DNA, DNA -tekniikka, ekspressiorakenne, ekspressiovektori, replikaation alkuperä, edistäjäalue, rekombinantti -RNA, plasmidit, rajoitussivustot, valittavissa oleva merkki

Mikä on kloonausvektori

Kloonausvektorit toimivat DNA -kantajina. Kaikissa kloonausvektoreissa on neljä erityisominaisuutta:

Tarkoituksesta riippuen on monia vaihtoehtoja klassisille kloonausvektoreille, kuten plasmideille, faageille ja kosmideille. Kloonausvektorin valinta riippuu insertin koosta ja sovelluksesta.

Plasmidit

Plasmidit ovat luonnossa esiintyviä kromosomien ulkopuolisia kaksijuosteisia DNA-molekyylejä, jotka kykenevät replikoitumaan itsenäisesti bakteerisolujen sisällä. Insertin kokoraja plasmideissa on 10 kb. Plasmideja käytetään kloonausvektoreina alakloonauksessa ja alavirran manipuloinnissa, cDNA -kloonauksessa ja ekspressiomäärityksissä. PBR322 on yksi ensimmäisistä geneettisesti muunnetuista plasmideista käytettäväksi yhdistelmä -DNA -tekniikoissa. PBR322 -plasmidi on esitetty kuviossa 1.

Kuva 1: pBR322

Faagit

Faagit ovat peräisin lambda -bakteriofagista, jossa bakteriofagin lambda -cos -paikka sallii sen pakkaamisen faagipäähän. Vektori -DNA: n replikaatio isäntäsolun sisällä aiheuttaa lopulta solujen hajoamisen. Faagivektoriin lisättävän insertin koko on 5-12 kb. Faagivektoreita käytetään genomisessa DNA -kloonauksessa, cDNA -kloonauksessa ja ekspressiokirjastoissa.

Kosmidit

Kosmidit ovat eräänlaisia ​​plasmideja, jotka sisältävät lambda -bakteriofagin cos -kohdan. Bakteriofagin lambda cos -paikka mahdollistaa sen pakkaamisen faagipäähän. Vaikka se on plasmidi, kosmidien replikaatio isäntäsolun sisällä ei ehkä lysoi solua kuten faagivektoreissa. Kosmidivektoriin kloonattavan insertin koko on 35-45 kb. Kosmidivektoreita käytetään genomisissa kirjastorakenteissa.

Koska nisäkkäiden geenit ovat usein suurempia kuin 100 kb, koko geenisekvenssiä ei voida kloonata klassisilla kloonausvektoreilla. Tämä ongelma kiertää matkimalla isäntäsolun kromosomien ominaisuudet vektoreiksi. Tämän tyyppisiä vektoreita kutsutaan keinotekoisiksi kromosomivektoreiksi. BAC: t (bakteerien keinotekoiset kromosomivektorit), YAC: t (hiivan keinotekoiset kromosomivektorit) ja MAC: t (nisäkkäiden keinotekoiset kromosomivektorit) ovat keinotekoisten kromosomivektorien tyyppejä.

BAC: t

Bakteerien keinotekoiset kromosomivektorit perustuvat Escherichia coli F -tekijäplasmidiin. BAC-vektoriin kloonattavan insertin koko on 75-300 kb. BAC -vektoreita käytetään suurten genomien analysointiin.

YAC: t

Hiivan keinotekoiset kromosomivektorit perustuvat Saccharomyces cerevisiae centromereen, telomeeriin ja muihin itsenäisesti replikoituviin sekvensseihin. YAC-vektoriin kloonattavan insertin koko on 100-1 Mb. YAC -vektoreita käytetään suurten genomien analysointiin.

MAC: t

Nisäkkäiden keinotekoiset kromosomivektorit perustuvat nisäkkään sentromeeriin, telomeeriin ja replikaation alkuperään. Insertin koko MAC -tiedostoissa on 100 kb - 1 Mb. MAC -yhdisteitä käytetään eläinten biotekniikassa ja ihmisen geeniterapiassa.

Mikä on lausekevektori

Ekspressiovektorit, joihin viitataan myös nimellä ilmerakenne, ovat eräänlaisia ​​plasmideja. Erityinen geeni tuodaan isäntäsoluun ekspressiovektoreilla, joissa transformoidun geenin ilmentymistä helpottaa ekspressiovektori käyttämällä solutranskriptio- ja translaatiokoneistoa. Ekspressiovektori käsittää säätelysekvenssejä, kuten tehostajia ja promoottorialueita, jotka johtavat tehokkaaseen geeniekspressioon. Tietyn proteiinin, kuten insuliinin, ilmentymisen jälkeen isäntäsolussa tuote on puhdistettava isäntäsolun proteiineista. Tästä syystä käyttöön otettu proteiini on joko merkitty histidiinillä (His -tunnisteella) tai millä tahansa muulla proteiinilla. Jotta lisätyn geenin tehokas ekspressio saadaan isäntäsolun sisään, seuraavat ekspressiosignaalit tulisi viedä ekspressiovektoriin.

Kuva 2: pGEX-3X

Kloonausvektorin ja lausekevektorin väliset yhtäläisyydet

Ero kloonausvektorin ja ekspressiovektorin välillä

Määritelmä

Kloonausvektori: Kloonausvektori on pieni pala DNA: ta, joka voidaan säilyttää vakaasti isäntäsolussa. Sitä käytetään geenien tuomiseen soluihin samalla kun saadaan useita kopioita insertistä.

Ilmaisuvektori: Ekspressiovektori on plasmidi, jota käytetään tuomaan tietty geeni kohdesoluun ja komentosolun mekanismeihin asianmukaisen geenituotteen tuottamiseksi.

Rooli

Kloonausvektori: Kloonausvektoreita käytetään useiden kopioiden saamiseksi insertoidusta DNA -segmentistä.

Ilmaisuvektori: Ekspressiovektoreita käytetään insertoidun DNA -segmentin geenituotteen, joko proteiinin tai RNA: n, saamiseen.

Tyypit

Kloonausvektori: Kloonausvektoreita voivat olla plasmidit, kosmidit, faagit, BAC: t, YAC: t tai MAC: t.

Ilmaisuvektori: Ekspressiovektori on plasmidivektori.

Vektorin ominaisuudet

Kloonausvektori: Kloonausvektorit käsittävät replikaation aloituskohdan, ainutlaatuiset restriktiokohdat ja valittavan markkerin.

Ilmaisuvektori: Ekspressiovektori sisältää kloonausvektorin tyypillisten piirteiden lisäksi tehostajia, promoottorialueen, terminaatiokodonin, transkription aloitussekvenssin ja translaation aloitussekvenssin vektorissa.

Johtopäätös

Kloonausvektoreita ja ekspressiovektoreita käytetään helposti yhdistelmä -DNA -tekniikassa vieraiden DNA -segmenttien tuomiseksi kohdesoluihin. Sekä kloonausvektorit että ekspressiovektorit kykenevät replikoitumaan itse isäntäsolun sisällä. Kloonausvektoreita käytetään tyypillisesti vieraiden geenien tuomiseen kohdesoluihin samalla kun saavutetaan lukuisia kopioita lisätystä geenistä. Ekspressiovektoreita käytetään geenituotteen, joko proteiinin tai RNA: n, saamiseksi isäntäsolun sisälle. Suurin osa yhdistelmäproteiineista, kuten insuliini, tuotetaan käyttämällä ekspressiovektoreita. Suurin ero kloonausvektorin ja ekspressiovektorin välillä on kunkin vektorin käyttö yhdistelmä -DNA -tekniikassa.

Viite:

1. "Kloonausvektoreita." Geenien kloonaus ja molekyylianalyysi. N.p., n.d. Web. Saatavana täältä. 18. kesäkuuta 2017. 2. “Kääntövektorit ja ilmaisuvektorit.” Rajaton. Rajaton, 26. toukokuuta 2016. Web. Saatavana täältä. 18. kesäkuuta 2017.

Kuva:

1. ”PBR322” Ayacop (+ Yikrazuul) - Oma työ (julkinen) Commons Wikimedia2: n kautta. ”PGEX-3X-kloonausvektori” Magnus Manske-Luonut Magnus Manske (CC BY-SA 3.0) Commons Wikimedian kautta